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植物组织培养过程中出现的各种污染判断与处理

发表时间：2025-06-03

一、污染原因判断：

1.培养基污染：若污染菌类是零星分散在培养基中，则可确定是人为引起的污染。比如培养基灭菌不彻底，开瓶时间过长，灭菌后存放时间过长等；高温蒸汽灭菌器的温度、压力、时间没有正确设置；过滤灭菌过程中滤膜孔径选择、过滤灭菌器的灭菌处理、过滤灭菌操作等均会影响培养基的灭菌效果。措施：严格按照实验要求，灭菌规程操作。

2.外植体污染：若污染菌类是从材料周围长起，且发生在 5 天以后，则说明是材料带的内生菌。可能是接种用具灭菌不彻底，接种时材料被污染；若从培养基以下开始长菌，发生时间较早，且有从里向外的趋势，则说明是切口引起的污染，原因可能是未剪去两个切口或者虽剪去切口但是所用器具带菌；或者是未及时发现污染苗，接种过程中引起交叉污染；措施：取材时应仔细选择，以减少污染的发生。

3.操作环节污染：接种室是否清洁、干燥、密封，是否经常用紫外灯照射、甲醛熏蒸、70% 的酒精喷雾杀菌等；超净工作台摆放物品杂乱，长时间不换滤网，导致净化能力降低；接种用具灭菌不彻底引起污染；操作不正确等。

措施：每次接种前半个小时，用 20% 的新洁尔擦洗室内设备、工作台面，再用紫外灯照射 20 min。还可以喷洒 70% 的乙醇进行消毒。除了培养基、接种材料、器具和用具保证无菌外，同时在接种时还需要严格进行无菌操作。

二、出现污染后处理措施：

1.真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉；若使细菌污染，只要及时发现，将材料上部未感染菌的部分剪下转接，材料仍可以用。

2.用抗生素等杀菌药剂的处理。但至今还未发现哪种抗生素能够对各种菌都有效，并且常常也会影响植物材料的正常生长分化。另一些药剂，虽有的杀菌效果好，但往往容易引起盐害，也无法利用。