ELISA常见问题合集

1.一次ELISA实验需要多长时间？

双抗体夹心ELISA法一次实验需要3.5-4小时，竞争ELISA法一次实验需要2-2.5小时。

2.血清样本如何处理？

全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3. 血浆样本如何处理？

建议选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，于1000×g离心15分钟，仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4.细胞上清液样本如何处理？

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（1000×g）。仔细收集上清。

5.细胞裂解液样本如何处理？

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或者超声破碎，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心10分钟左右（5000×g）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6.组织样本如何处理？

用预冷的PSB (0.01M,pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。

7.为什么有的试剂盒是采用竞争ELISA法？

小分子抗原或半抗原因为缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法。其原理是标本中的抗原和固相载体上的抗原竞争生物素化抗体上的结合位点，标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的生物素化抗体愈少，最后的显色也愈浅，即显色深浅与样本中的抗原浓度成反比。小分子激素等ELISA测定多用此法。

8.用什么软件处理ELISA检测的数据比较好？

ELISA标准曲线拟合可以应用Curve Expert软件进行数据分析。它使用非常方便，可以生成漂亮的曲线应用到论文之中。软件可以在下载中心进行下载。